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23.(12分)酵母双杂交技术是一种用于检测两种蛋白质间是否存在相互作用的分子生物学技术,其基本原理如图1所示。研究人员拟利用该技术探究水稻SH蛋白与ELC蛋白之间是否存在相互作用,图2所示为分别用于构建重组质粒pAD-SH和pBD-ELC的两种空白质粒。请回答下列问题:蛋白Z蛋白X>蛋白Y低BD¥→转录启动转录启动子上游报告基因启动子上游报告基因激活序列激活序列图1注:启动子BamHILEU:亮氮酸合成基因NdeITRP:色氨酸合成基因TRP启动子SmaI限制酶识别序列及切割位点:ADBDPAD终止子BamHI:5'-GGATCC-3pBDHindIIl:5'-AAGCTT-3'终止子NdeI:5'-CATATG-3LEUSmaI:5'-CCCGGG-3图2(1)构建重组质粒时需要使用PCR技术扩增目的基因,扩增时除加入模板、含Mg+的缓冲液、引物外,还需添加▲(答两点),当温度下降到50C时,PCR反应体系中发生的反应是(2)为使ELC基因正确插入质粒pBD,利用PCR扩增ELC基因时应在两种引物的端分别添加_限制酶的识别序列,宜用_▲(选填"E.coliDNA连接酶"或"T4DNA连接酶”将质粒pBD和ELC基因的末端进行连接。(3)将不同类型的质粒导入自身不能合成色氨酸、亮氨酸、腺嘌呤和组氨酸的营养缺陷型酵母细胞(含有图1所示启动子和报告基因)中,然后分别接种于两种选择培养基上培养,结果如下表所示。请回答:导入质粒类型培养基1(-Trp-Leu)培养基2(-Trp-Leu-Ade-His)选择培养基类型甲组:pAD和pBD-ELC乙组:pAD-SH和pBD录制丙组:pAD-SH和pBD-ELC注:-"表示培养基中缺乏该物质;Trp:色氨酸Lcu:亮氨酸Ade:腺嘌呤His:组氨酸;①三组酵母菌均可在只缺少色氨酸和亮氨酸的培养基上生长,说明_。该实验的报告基因为-合成基因。设置甲和乙实验组目的是(2分)。②根据结果分析,SH蛋白与ELC蛋白(选填“能"或“不能"相互作用,理由是_(2分)。生物学试卷第7页(共8页)
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